СПОСОБ ДЕТЕКЦИИ СПЕЦИФИЧЕСКИХ НУКЛЕОТИДНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ И НУКЛЕОТИДНЫХ ЗАМЕН С ПОМОЩЬЮ ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ С ЭФФЕКТОМ ГАШЕНИЯ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ЗОНДА ПРАЙМЕРОМ
LAY M.J. ЕТ AL., Real-time fluorescence genotyping of factor V Leiden during rapid-cycle PCR, Clin Chem., 1997, v.43, 12, p.2262-2267. US 7160998 B2, 09.01.2007. DIDENKO V.V. ET AL., DNA probes using fluorescence resonance energy transfer (FRET): designs and applications, Biotechniques. 2001, v.31, 5, p.1106-1116, 1118, 1120, 1121.
Имя заявителя:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Смоленская государственная медицинская академия федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (RU), Закрытое акционерное общество "Синтол" (RU)
Изобретатели:
Эйдельштейн Михаил Владимирович (RU) Алексеев Яков Игоревич (RU) Никулин Анатолий Александрович (RU) Романов Андрей Вячеславович (RU) Козлов Роман Сергеевич (RU)
Патентообладатели:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Смоленская государственная медицинская академия федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (RU) Закрытое акционерное общество "Синтол" (RU)
Реферат
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу детекции специфических нуклеотидных последовательностей и нуклеотидных замен с помощью ПЦР в режиме реального времени. Способ включает выделение нуклеиновых кислот из исследуемых образцов, подбор соответствующих олигонуклеотидных зондов и праймеров и проведение ПЦР-амплификации целевой нуклеиновой кислоты. Выполняют анализ кривых плавления зондов. При этом для амплификации целевой нуклеиновой кислоты используют соответствующую пару праймеров, один из которых, а именно реверсный, служит для образования цепи ДНК, комплементарной зонду, и содержит нефлуоресцирующий гаситель флуоресценции внутри нуклеотидной последовательности, ближе к 3' концу. А для детекции участка целевой нуклеиновой кислоты, находящегося между участками связывания праймеров, используют соответствующий 3'-флуоресцентно-меченый олигонуклеотидный зонд, участок связывания которого с одной стороны частично перекрывается с областью связывания немеченого форвардного праймера, а с другой стороны находится на расстоянии нескольких нуклеотидов от 3'-конца праймера, несущего гаситель флуоресценции. Предложенное изобретение позволяет повысить эффективность анализа специфических нуклеотидных последовательностей и нуклеотидных замен с помощью ПЦР в режиме реального времени. 11 з.п. ф-лы, 10 ил., 3 табл., 3 пр.
Поиск патентов
Получить полное описание патента