MAINIERI D. ЕТ AL.: "Zeolin. A new recombinant storage protein constructed using maize g-zein and bean phaseolin", Plant Physiology, 2004, v. 136, p.3447-3456. TULLY R.E. ЕТ AL.: "Protein bodies of castor bean endosperm", Plant. Physiol., 1976, v.58, p.710-716. BAGGA S. ЕТ AL.: "Accumulation of 15-kilodalton zein in novel protein bodies intransgenic tobacco", Plant. Physiol., 1995, v.107, p.13-23. ROSENBERG N. ЕТ AL.: "Wheat {Trificum aesfivum L.) -Gliadin accumulates in dense protein bodies within the endoplasmic reticulum of yeast", Plant Physiol., 1993, v.102, p.61-69. TORRENT M. ЕТ AL.: "Role of structural domains for maize gamma-zein retention in Xenopus oocytes", Planta, 1994, v.192, n.4, p.512-518. WO 2004003207 (ERA PLANTECH), 08.01.2004. VANDENBROECK K. ЕТ AL.: "Refolding and single-step purification of porcine interferon-gamma from Escherichia coli inclusion bodies. Conditions for reconstitution of dimeric IFN-gamma", Eur. J. Biochem, 1993, v.215, n.2, p.481-486. HAELEWYN J. ЕТ AL.: "A rapid single-step purification method for human interferon-gamma from isolated Escherichia coli inclusion bodies", Biochem Mol Biol Int, 1995, v.37, n.6, p.1163-1171. PENG C.C. ЕТ AL.: "A system for purification of recombinant proteins in Escherichia coli via artificial oil bodies constituted with their oleosin-fused polypeptides", J. Biotechnol., 2004, v.111, n.1, p.51-57. CURTIS-FISH J. ET AL.: "Native conformation at specific residues in recombinant inclusion body protein in whole cells determined with solid-state NMR spectroscopy", J. Am. Chem. Soc., 2008, v.130, n.38, p.12568-12569. SHARMA ET AL.: "Intein-mediated protein purification of fusion proteins expressed under high-cell density conditions in E.coli", Journal of Biotechnology, 2006, v.125, p.48-56. TORRENT M ET AL.: "Eukaryotic protein production in designed storage organelles", BMC Biology 2009, 7:5 doi:10.1186/1741-7007-7-5. RACHMAWATI ET AL.: "Production and characterization of recombinant human lactoferrin in transgenic Javanica rice". Breeding science, 2005, v.55, p.213-222.
Изобретение относится к способу выделения рекомбинантных белков из трансформированных хозяев. Данные рекомбинантные белки содержат индуцирующую белковые тельца последовательность, слитую с последовательностью представляющего интерес продукта. При осуществлении способа получают водный гомогенат трансформированных клеток-хозяев, которые экспрессируют слитый белок в виде рекомбинантных подобных белковым тельцам скоплений (RPBLA), обладающих плотностью приблизительно от 1,1 до 1,35 г/мл. Гомогенат центрифугируют с образованием фракций с различной плотностью, либо в отсутствие дополнительного обеспечивающего плотность раствора, либо с помощью слоя с определенной плотностью, которая меньше чем плотность RPBLA. В результате образуются фракции, которые содержат относительно сниженную концентрацию RPBLA, и фракция, которая содержит относительно повышенную концентрацию RPBLA. Фракцию со сниженной концентрацией RPBLA отделяют от фракций с относительно повышенной концентрацией RPBLA. Затем очищают указанный слитый белок. Изобретение обеспечивает простоту осуществления, быстроту и эффективную очистку рекомбинантных белков. 14 з.п. ф-лы, 8 ил., 1 табл.
Поиск патентов
Получить полное описание патента