ЕР 1449848 А1, 25.08.2004. RU 2167936 С2, 27.05.2001. WO 0155174 A2, 02.08.2001. US 5410026 A, 25.04.1995. EP 0373325 A2, 20.06.1990. EP 0596459 A2, 11.05.1994. WO 9942486 A1, 26.08.1999. US 4929700 A, 29.05.1990.
Имя заявителя:
ДЖЕНЕНТЕК, ИНК. (US)
Изобретатели:
ПИЗАРРО Шелли (US) САНЧЕС Айлен (US) ШМЕЛЬЦЕР Чарльз Х. (US)
Патентообладатели:
ДЖЕНЕНТЕК, ИНК. (US)
Приоритетные данные:
14.07.2006 US 60/830,831
Реферат
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для выделения рекомбинантного фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) из культуры прокариотических клеток. Проводят стадии выделения рекомбинантного белка VEGF из культуры клеток и растворения в первом буферном растворе, рН более 9, который содержит в конечной концентрации: 1 М мочевину, 300 мМ аргинин, 10 мМ CHES, 5 мМ EDTA, рН 11, или 1 М мочевину, 300 мМ аргинин, 10 мМ ТРИС, 5 мМ EDTA, рН 11. Затем осуществляют рефолдинг растворенного белка во втором буферном растворе с добавлением воздуха, рН>9, но 11, который содержит в конечной концентрации: 1 М мочевину, 15 мМ цистеин, 2 мМ DTT, 100 мМ аргинин, 10 мМ CHES, 5 мМ EDTA, рН 10, или 1 М мочевину, 15 мМ цистеин, 0,5-2 мМ DTT, 100 мМ аргинин, 10 мМ ТРИС, 5 мМ EDTA, рН 10, и выделяют повторно свернутый рекомбинантный белок. Как вариант возможно проведение растворения и рефолдинга указанного белка в комбинированном буферном растворе, рН>9, но 11, с добавлением воздуха или кислорода, где комбинированный буферный раствор содержит в конечной концентрации: 1 М мочевину, 15 мМ цистеин, 2 мМ DTT, 100 мМ аргинин, 10 мМ CHES, 5 мМ EDTA, рН 10, или 1 М мочевину, 15 мМ цистеин, 0,5-2 мМ DTT, 100 мМ аргинин, 10 мМ ТРИС, 5 мМ EDTA, рН 10. Изобретение позволяет выделять повторно свернутый рекомбинантный белок VEGF из культуры прокариотических клеток. 2 н. и 14 з. п. ф-лы, 10 ил.
Поиск патентов
Получить полное описание патента