REGÉCZY N. ЕТ AL, Telomere length analysis on cord blood cells by the flow-FISH method, Haematologia, 2002, v.32, no.3, p.265-9. HULTDIN M. ЕТ AL, Telomere analysis by fluorescence in situ hybridization and flow cytometry, Nucleic Acids Res, 1998, v.26, no.16, p.3651-6. WO 2009021518 A1, 19.02.2009.
Имя заявителя:
Смолянинов Александр Борисович (RU), Хурцилава Отари Гивиевич (RU), Смирнова Наталья Владимировна (RU), Новикова Полина Юрьевна (RU), Общество с ограниченной ответственностью "Покровский банк стволовых клеток" (RU), Учреждение Российской академии наук Институт цитологии РАН (RU)
Смолянинов Александр Борисович (RU) Хурцилава Отари Гивиевич (RU) Смирнова Наталья Владимировна (RU) Новикова Полина Юрьевна (RU) Общество с ограниченной ответственностью "Покровский банк стволовых клеток" (RU) Учреждение Российской академии наук Институт цитологии РАН (RU)
Реферат
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу измерения длины теломер клеток лейкоконцентрата пуповинной крови. Данный способ включает выделение центрифугированием гепаринизированных мононуклеарных клеток пуповинной крови (далее ПК) в градиенте плотности на Ficoll-PaquePLUS. После чего осуществляют тщательное отмывание в среде PBS+0,1% BSA и денатурацию при температуре 82°С суспензии, состоящей из клеток ПК и контрольной клеточной культуры 1301, поддерживаемой в среде RPMI с добавлением 10% бычьей сыворотки глютамина и пенициллина со стрептомицином. Далее проводят распределение анализируемых и контрольных клеток по двум парам пробирок, добавляя к ним до 0.5 мл PBS 0,1% раствора BSA, центрифугируя с ускорением 500g в течение 5 минут. Потом вливают в две пробирки с клетками гибридизационный буфер, а во вторую пару - вливают гибридизационный буфер с пептидо-нуклеиновым зондом. Затем проводят инкубацию их в темноте 2-20 часов, отмывают, перемешивают, центрифугируют, окрашивают в растворе пропидиум-йодида и RNK А. Далее осуществляют анализ клеточных образцов с определением их относительной длины теломер в зависимости от длины теломер клеточной культуры 1301 с учетом индекса ДНК. Предложенное изобретение позволяет повысить качество определения свойств трансплантата, образцов гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови для трансплантации.
Поиск патентов
Получить полное описание патента