Федеральное государственное учреждение здравоохранения Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора (RU)
Реферат
Способ предусматривает использование клеточной модели для оценки токсичности антигенов В. pseudomallei - возбудителя мелиоидоза in vitro. Реакцию цитотоксичности выполняют на перевиваемых монослойных клеточных линиях мышиных фибробластов L929 или клеток яичника китайского хомячка СНО-К1. До начала экспериментов клетки выводят из криоконсервированного состояния, параллельно готовят исследуемые антигены, изолированные из различных структурных компонентов бактериальной клетки возбудителя мелиоидоза, с рН 7,0±0,1, стерилизуют их через мембранные фильтры и вносят по 20 мкл в лунки подготовленных к основным опытам в 48-луночных культуральных пластинах со сформированным монослоем клеток-мишеней, оставляя на каждой пластине по 2 лунки с интактной культурой (контроль). Пластину инкубируют в СО2-инкубаторе при 37°С и насыщении атмосферы 5-7% СО2 в течение 3 суток. Лунки культуральных пластин ежедневно просматривают, оценивая наличие или отсутствие изменений морфологии и функционального состояния клеток-мишеней по сравнению с контролем. Учету подлежат время контакта биологически активного вещества с клетками, концентрации вносимых в лунку веществ, морфологические и адгезивные свойства клеток. В случае изменения морфологических и/или адгезивных свойств клеток, в том числе и гибель клеток, определяют наличие цитотоксического воздействия исследуемых антигенов на клетки, при этом гибель 50% и более клеток свидетельствует о проявлении острой цитотоксичности антигенов. Способ по изобретению универсален, воспроизводим, пригоден для проведения множественного скрининга антигенов В. pseudomallei, при работе с образцами экспериментальных химических вакцин, антигенным материалом, используемым для иммунизации животных на этапах получения высокоактивных сывороток. 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 3 пр.
Поиск патентов
Получить полное описание патента