RU 2000109193 А, 10.07.2002. US 2009155299 A1, 18.06.2009. RU 2203317 C2, 27.04.2003. SU 5677274 A, 14.10.1997. WO 2006039707 A2, 13.04.2006.
Имя заявителя:
Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральное агентство по науке и инновациям (RU), Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН (RU)
Изобретатели:
Козырь Арина Владимировна (RU) Дронина Мария Алексеевна (RU) Шемякин Игорь Георгиевич (RU) Колесников Александр Владимирович (RU)
Патентообладатели:
Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральное агентство по науке и инновациям (RU) Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН (RU)
Реферат
Способ детекции сибиреязвенного патогена в окружающей среде и биологических жидкостях основан на функциональной детекции активности одного из компонентов сибиреязвенного токсина, слабой протеазы летального фактора сибирской язвы (LF). Примененный принцип высокочувствительной детекции протеолитической активности LF базируется на системе амплификации сигнала, происходящего от акта разрезания субстрата, при помощи находящегося в составе субстрата вспомогательного фермента щелочной фосфатазы Escherichia coli (АР). В составе рекомбинантного субстрата LF помимо щелочной фосфатазы и специфической для LF субстратной последовательности RRKKVYPYPME находятся пептид, биотинилирующийся in vivo и in vitro при помощи биотин-лигазы E.coli и обеспечивающий иммобилизацию субстрата на твердой фазе (поверхности плашек) за счет взаимодействия с авидином и его производными, и последовательности шести гистидинов для очистки рекомбинантного субстрата из периплазмы E.coli при помощи металл-хелатной смолы. Способ по изобретению обладает высокой чувствительностью, с использованием флюоресцеин дифосфата позволяет детектировать до 1 пМ летального фактора, быстротой в исполнении, высокой специфичностью, низким риском ложноположительных сигналов. 1 ил.